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Tipo do documento: Tese
Documento sob sigilo. Prazo previsto para disponibilização total:  360 dias. Motivo do sigilo: A tese encontra-se no formato de artigos; o capítulo I trata-se de um artigo já submetido, aguardando análise da revista, no entanto, o capítulo II trata-se de um artigo original e inédito em fase de revisão de dados, tradução e submissão, portanto, ainda não podem ser de conhecimento público.
Título: ATIVIDADE ANTI-Candida DE Anacardium occidentale L. in vitro e in vivo
Título(s) alternativo(s): ANTI-Candida ACTIVITY OF Anacardium occidentale L. in vitro and in vivo
Autor: OLIVEIRA, Aluisio da Silva 
Primeiro orientador: GUERRA, Rosane Nassar Meireles
Primeiro membro da banca: GUERRA , Rosane Nassar Meireles
Segundo membro da banca: SILVA, Mayara Cristina Pinto da
Terceiro membro da banca: MONTEIRO NETO , Valério
Quarto membro da banca: ABREU JÚNIOR , Afonso Gomes
Quinto membro da banca: MONTEIRO, Cristina de Andrade
Resumo: As infecções fúngicas ocasionadas pelas espécies de Candida spp. aumentaram em todo o mundo, respondendo pelas maiores taxas de infecções hospitalares e mortalidade. O tratamento da candidíase inclui diferentes tipos de antifúngicos, como o Fluconazol e a Anfotericina B. No entanto, o aumento de cepas resistentes motiva a busca de novos agentes terapêuticos. Anacardium occidentale, espécie vegetal nativa do Brasil, utilizada popularmente para tratar infecções e inflamações tem sido alvo na bioprospeção de compostos bioativos. O presente estudo investigou o potencial antifúngico do Extrato Etanólico das flores de A. occidentale (EAO) contra Candida spp e sua ação in vitro sobre alguns fatores de virulência. Também invetigamos a composição química e a atividade hemolítica do extrato e o seu efeito antifúngico na infecção em larvas de Tenebrio molitor por Candida spp. e em camundongos submetidos à infecção por Candida albicans. A composição química foi analisada por espectrometria de massa com infusão direta. A atividade anti-Candida foi avaliada pelo ensaio de microdiluição em caldo para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Fungicida Mínima (CFM) sobre as linhagens padrão de Candida albicans (ATCC10231) e Candida parapsilosis (ATCC 22019) e isolados clínicos dessas duas espécies. Foi também avaliado o efeito do EAO na adesão, no biofilme e sobre a produção das exoenzimas fosfolipase e proteinase. A atividade hemolítica do extrato foi avaliada em hemácias de carneiro. Larvas de T. molitor foram utilizadas para avaliar os efeitos do EAO na sobrevida, após a infecção letal por Candida spp. Para infecção por Candida albicans, camundongos Swiss, fêmeas, 2 meses de idade foram imunussuprimidos com 50mg/kg de ciclofosfamida, via intraperitoneal, 48h antes da infecção. Os animais imunossuprimidos foram divididos em grupos (N=5) e tratados via subcutânea no momento da infecção: Controle, recebeu salina; ANFO B, tratado com Anfotericina B (0,6 mg/Kg); EAO, tratado com 5 mg/Kg do extrato. Após 24 horas foram eutanasiados para avaliar o efeito do EAO considerando a carga fúngica e a produção de citocinas. No EAO foram identificados como compostos majoritários: heptagaloilglucopiranosídeo, trigaloilglicopiranosídeo, ácido anacárdico e ácido galoilquínico. O EAO apresentou atividade anti-Candida, tanto para as linhagens padrão quanto para os isolados clínicos de C. albicans e C. parapsilosis . Os valores de CIM variaram entre 1,97 a 3,13 mg/mL para as linhagens padrão e 1,97 a 6,25 mg/mL para as cepas clinicas, mostrando que o extrato inibiu o crescimento de todas as cepas fúngicas, com ação fungicida e/ou fungistática de acordo com a relaçao CIM/CFM. Além disso, o tratamento com EAO inibiu a adesão e o biofilme de todas as espécies testadas e interferiu na produção das exoenzimas proteinase e fosfolipase, dependendo da concentração. Nos ensaios in vivo, o EAO aumentou a sobrevida das larvas de T. molitor letalmente infectadas com C.albicans e C. parapsilosis e reduziu a carga fúngica no sangue e no rim de camundongos infectados por C. albicans. Além disso, o tratamento interferiu na produção de citonas aumentando a produção de IL-6 e reduzindo a produção de TNF-. Em conclusão o EAO aumentou a sobrevida das larvas de T. molitor infectado por Candida spp e reduziu a infecção de camundongos infectados por Candida albicans, certamente devido a sua ação anti-Candida de largo espectro, pois o extrato inibiu eficientemente o crescimento de C. albicans e C. parapsilosis, e também os fatores de virulência, atividade que pode está relacionada a presença dos compostos identificados no extrato.
Abstract: Fungal infections caused by Candida spp. increased worldwide, and are related to the high rates of hospitalization and mortality. The treatment of candidiasis includes different types of antifungals, such as Fluconazole and Amphotericin B. However, the increase number of resistant strains motivates the search for new therapeutics. Anacardium occidentale L., a plant species native to Brazil, is popularly used for the treatment of infections and inflammation, for this reason, this species is an interesting target for the bioprospecting of new bioactive compounds. The present study investigated the antifungal effect of the Ethanol Extract of A. occidentale flowers (EAO) against Candida spp, considering the activity against some virulence factors in vitro, and the protective effect in alternative against lethal Candida infection in Tenebrio molitor larvae and mice. The chemical composition of the extract was determined by Mass Spectrometry (MS) with direct melting. Minimum Inibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) determined the antifungal activity. It was also determined the EAO effect on Candida adhesion, biofilm development and the phospholipase and proteinase exoenzymes. The hemolytic activity of EAO was evaluated using sheep red blood cells. T. molitor lethally infected with C. albicans or C. parapsilosis received EAO (intracoelomic, 5mg/Kg) to evaluate the extract effecton survival. Swiss female mice, 2 months of age, were immunosuppressed with Cyclophosphamide (50mg/kg, via intraperitoneal), 48h before infection. Those animals were divided into three groups (N=5/group): Control, received saline groups; ANFO B, treated with Amphotericin B (0.6 mg/kg); EAO, treated with the extract (5 mg/Kg). After 24 hours the animals were euthanized to evaluate the effect of EAO on fungal burden, cellularity and cytokine production.. The major compounds found the EAO included; heptagalloylglucopyranoside, trigalloylglucopyranoside, anacardic acid and galoilquinic were identified. EAO showed anti-Candida activity, for reference strains and clinical isolates of C.albicans and C. parapsilosis. The MIC values ranged from 1.97 to 3.13 mg/mL for the reference strains and 1.97 to 6.25 mg/mL for the clinical strains. The extract inhibited the growth of all fungal species tested, indicating fungicidal and/or fungistatic action according to the MIC/CFM ratio. In addition, EAO inhibited adhesion and biofilm in all tested species and interfered with the production of the proteinase and phospholipase exoenzymes. EAO increased the lifespan of T. molitor larvae and mouse and increased IL-6 and decrease TNF-levels in serum of infected mice. In conclusion, treatment with EAO increased the survival of T. molitor larvae and mice showed activity certainly related to a broad spectrum of antiCandida action, since the extract was also able to inhibit the growth of C. albicans and C. parapsilosis, the adhesion, biofilm and exoenzymes actions. Those activities may be due to the presence of compounds in this extract.
Palavras-chave: Anacardium occidentale;
Candida albicans;
Candida parapsilosis;
Antifúngico;
Ciclofosfamida;
Citocinas
Anacardium occidentale;
Candida;
anti-Candida;
Cyclophosphamide;
immunosuppression
Área(s) do CNPq: Ciências da Saúde
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal do Maranhão
Sigla da instituição: UFMA
Departamento: DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA/CCBS
Programa: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE/CCBS
Citação: OLIVEIRA, Aluisio da Silva. Atividade anti-candida de anacardium occidentale l. in vitro e in vivo. 2022. 14 f. Tese (Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde/CCBS) - Universidade Federal do Maranhão, São Luís, 2022.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: https://tedebc.ufma.br/jspui/handle/tede/tede/4273
Data de defesa: 20-Oct-2022
Appears in Collections:TESE DE DOUTORADO - PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE

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