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Tipo do documento: Tese
Título: ATIVIDADE ANTI-Candida de Vismia guianensis (Aubl.) Chosy: AVALIAÇÃO in vitro, in vivo e in silico.
Título(s) alternativo(s): ANTI-Candida activity of Vismia guianensis (Aubl.) Chosy: EVALUATION in vitro, in vivo and in silico.
Autor: MOTTA, Elizangela Araújo Pestana 
Primeiro orientador: GUERRA, Rosane Nassar Meireles
Primeiro coorientador: ROCHA, Claudia Quintino
Primeiro membro da banca: GUERRA, Rosane Nassar Meireles
Segundo membro da banca: ROCHA, Claudia Quintino da
Resumo: Vismia guianensis (Aubl.) Chosy, espécie vegetal típica de região amazônica, é utilizada popularmente para tratar infecções da pele, como cicatrizante e purgativo. Investigou-se a ação anti-Candida do extrato hidroalcoólico das folhas de V. guianensis (EHVG) in vitro, in vivo e in silico. O EHVG foi obtido por maceração das folhas em álcool (70%), por 7 dias, seguido por rotaevaporação e liofilização. O EHVG foi submetido a avaliação fitoquímica e a caracterização cromatográfica por HPLC-UV e FIA-ESI-IT-MSn. A citotoxicidade do EHVG foi avaliada pelas técnicas de MTT, vermelho neutro e pela determinação da atividade hemolítica. A ação antifúngica do EHVG foi avaliada in vitro, para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) e fungicida mínima (CFM) utilizando linhagens padrão de Candida albicans, C. glabrata e linhagens clínicas de C.albicans. Avaliou-se também os efeitos do EHVG sobre os principais fatores de virulência incluindo ação sobre: a adesão fúngica, biofilmes jovem e maduro e a cinética de crescimento fúngico. Em outro grupo de experimentos, determinou-se a ação do extrato sobre as enzimas proteolíticas, em cepas de Candida albicans sensíveis Ca(S)Flu ou resistentes Ca(R)Flu ao Fluconazol, e o efeito sinérgico do EHVG associado a Anfotericina B e ao Fluconazol. A avaliação in vivo determinou a sobrevida de camundongos Swiss, fêmeas, imunosuprimidos com ciclofosfamida, 48 horas antes da infecção letal por C. albicans (3x108), que foram tratados com EHVG (5mg/kg), em seguida a infecção, ou 6 horas depois. Para análise in silico, por docagem molecular e simulações por dinâmica molecular, selecionou-se a enzima CaCYP51 de C. albicans como alvo de quatro compostos identificados no EHVG. Nesse ensaio o Posoconazol foi usado como controle positivo. Foram identificados na triagem fitoquímica do EHVG catequinas, saponinas, antocianinas, antocianidinas, benzoquinonas e flavonóides e a caracterização química do EHVG, permitiu identificar como compostos majoritários: vismiona D, antraquinona F, kaempeferol, quercetina e ácido elágico. O EHVG apresentou baixa citotoxicidade, nas várias concentrações testadas e inibiu, eficientemente, o crescimento tanto das formas planctônicas como dos biofilmes jovens e maduros de C. albicans e C. glabrata. O EHVG apresentou sinergismo com Fluconazol e com Anfotericina B, quanto a ação anti- Candida, sendo efetivo até mesmo para o isolado clínico resistente ao fluconazol (Ca(R)Flu). Animais tratados com EHVG, em qualquer intervalo, apresentaram melhor sobrevida e maior expectativa de vida, com eficácia semelhante as drogas padrão. Na análise in silico os 4 compostos testados apresentaram afinidade com a enzima CaCYP51, mas a Vismiona D apresentou melhores resultados quanto a afinidade, sendo inclusive superior ao Posoconazol. Conclui-se que o EHVG apresenta atividade anti-Candida, in vitro e in vivo, confirmando os ensaios in silico, possivelmente porque é capaz de inibir mecanismos de virulência de Candida albicans e C. glabrata, sendo efetivo até mesmo em linhagem de C. albicans resistente ao Fluconazol. Conclui-se, também, que a ação anti-Candida, pode estar relacionada a combinação de pelo menos 4 compostos químicos presentes no extrato, sendo vismiona D o mais efetivo deles. Em conjunto, os dados mostram que Vismia guianensis é um importante alvo para a bioprospecção de novas drogas com ação anti-Candida.
Abstract: Vismia guianensis (Aubl.) Chosy, a typical plant species from the Amazon region, is popularly used to treat skin infections, as healing and purgative. We investigated the anti-Candida effect of hydroethanolic extract from the leaves of V. guianensis (EHVG) in vitro, in vivo, and in silico. The leaves were macerated in alcohol (70%), for 7 days, followed by evaporation and lyophilization to obtain the EHVG. The EHVG was submitted to phytochemical screening and chromatographic characterization by HPLC-UV and FIA-ESI-IT-MSn. The EHVG cytotoxicity was evaluated by neutral red, MTT, and by determination of hemolytic activity. The antifungal activity in vitro was assessed by the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicide (CFM) using standard strains of Candida albicans, C. glabrata, and clinical isolates of C. albicans. It was also evaluated in vitro the effects of EHVG on the virulence factors such as fungic adhesion, young and mature biofilms, and fungal growth kinetics. In another group of experiments, we determined the effect of EHVG on the proteolytic enzymes using two C. albicans strains, one sensitive (Ca(S)Flu), and the other resistant (Ca(R)Flu) to Fluconazole. The synergistic effect of EHVG with Amphotericin B or Fluconazole was also determined. The in vivo evaluation was performed in Swiss female mice, immunosuppressed with cyclophosphamide, 48 hours before the lethal infection by C. albicans (3x108). Groups treated with EHVG (5mg/kg), at the time of infection, or 6 hours later, were compared to the untreated control group. The in silico analysis was performed by molecular docking and molecular dynamics simulations, using the enzyme CaCYP51 from C. albicans as the target and four compounds identified in the EHVG. Posaconazole was the positive control in this assay. According to the phytochemical screening, EHVG is rich in catechins, saponins, anthocyanins, anthocyanidins, benzoquinones, and flavonoids. After the chemical characterization of EHVG, it was possible to identify as the main compounds: vismiona D, anthraquinone F, kaempferol, quercetin, and ellagic acid. EHVG presented low cytotoxicity at the various concentrations and efficiently inhibited the growth of both planktonic forms and biofilms formation. The EHVG presented a synergistic effect when associated either to Fluconazole or Amphoterin B and showed an anti-Candida effect even in the Ca(R)Flu strain. Animals treated with EHVG, always, presented better survival and longer life expectancy, with similar efficacy to standard drugs. The four evaluated compounds showed high affinity for the enzyme CaCYP51 after in silico analysis. However, Vismiona D presented better results, even superior to Posaconazole. We conclude that EHVG exhibits anti- Candida activity, in vitro as in vivo, confirming the in silico assays, probably because it can inhibit the various fungus virulence mechanisms, even in the Fluconazole resistant strain. It is possible to suggest that the anti-Candida action may be due to the combination of at least four chemical compounds present in the extract, but vismione D, seems to be the most effective. Based on this, it is reasonable to propose Vismia guianensis as an essential target for bioprospecting new drugs for the Candida infections treatment.
Palavras-chave: Candida albicans;
Candida glabrata;
Fluconazol;
CaCYP51;
Vismia guianensis;
Vismiona
Candida albicans;
Candida glabrata;
Fluconazole;
CaCYP51;
Vismia guianensis;
Vismione
Área(s) do CNPq: Farmácia
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal do Maranhão
Sigla da instituição: UFMA
Departamento: DEPARTAMENTO DE SAÚDE PÚBLICA/CCBS
Programa: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE/CCBS
Citação: MOTTA, Elizangela Araújo Pestana. Atividade Anti-Candida de Vismia guianensis (Aubl.) Chosy: Avaliação in vitro, in vivo e in silico.. 2020. 154 f. Tese( Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde/CCBS) - Universidade Federal do Maranhão, São Luís, 2020.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: https://tedebc.ufma.br/jspui/handle/tede/tede/3658
Data de defesa: 3-Aug-2020
Appears in Collections:TESE DE DOUTORADO - PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE

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