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Tipo do documento: Dissertação
Título: Caracterização fenotípica de células mononucleares sanguíneas de pacientes com periodontite crônica
Título(s) alternativo(s): Phenotypic characterization of blood mononuclear cells of patients with chronic periodontitis
Autor: NASCIMENTO, Johnny Ramos do 
Primeiro orientador: NASCIMENTO, Flávia Raquel Fernandes do
Primeiro coorientador: LIBÉRIO, Silvana Amado
Primeiro membro da banca: MACIEL, Andrezza
Segundo membro da banca: CARVALHO, Rosana Costa Casanovas de
Terceiro membro da banca: SOERO, Paulo Vitor Pereira
Resumo: Introdução: A periodontite crônica (PC) é uma doença infecto-inflamatória dos tecidos de proteção e sustentação dos dentes que, em seu último estágio, pode resultar na perda do elemento dentário. Estudos têm demonstrado que o tipo de resposta imune do hospedeiro e o envolvimento de células imunes, como macrófagos e linfócitos T, podem influenciar e alterar a evolução da doença. Apesar de estar restrita ao tecido periodontal e ser associada a outras doenças, a repercussão sistêmica da PC sobre as células imunes ainda não está esclarecida. Objetivo: Caracterizar o perfil fenotípico das células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de indivíduos com Periodontite crônica. Métodos: Trata-se de um estudo do tipo transversal com pacientes portadores de PC moderada ou avançada, atendidos na Clínica de Periodontia do Curso de Odontologia da UFMA. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética da UFMA e todos os indivíduos receberam informações a respeito da pesquisa e assinaram o TCLE. Foram formados o Grupo Controle (GC)(n= 22), com indivíduos sadios e sem PC, e o Grupo Periodontite Crônica (GPC)(n=26), com pacientes com PC moderada ou avançada e sem alterações sistêmicas. Foram coletadas amostras de sangue (4 mL), para obtenção do plasma e dosagem das citocinas interleucinas (IL)-2, IL-4, IL-6, IL-10, interferon (IFN)-, fator de necrose tumoral (TNF)- e IL-17A pelo método CBA. Para imunofenotipagem, as PBMCs foram obtidas por gradiente de densidade utilizando a solução de Ficoll-PaqueTM PLUS. Para fenotipagem de monócitos, linfócitos B e linfócitos T as PBMCs foram contadas, ajustadas e marcadas com os seguintes anticorpos monoclonais conjugados com fluorocromos: anti-CD3 e anti-CD14 conjugados com FITC; anti-CD4, anti-CD25, anti-CD14 e anti-HLA-DR conjugados com PE e anti-CD19, anti-CD86, anti-CD8 e anti-CD4 conjugados com PerCP. As amostras foram adquiridas eno citômetro FACSCalibur e os dados analisados nos softwares FCAP ARRAY Versão 3.0 e FlowJo Versão 10. Resultados: Houve aumento no número total de Linfócitos T (CD3+), bem como de Linfócitos T auxiliares (CD3+/CD4+) e dos Linfócitos T auxiliares ativados (CD3+/CD4+/CD25+) no GPC quando comparado ao GC. Houve também um aumento no número de monócitos (CD14+), bem como dos monócitos apresentadores de antígenos (CD14+/HLADR+/CD86+) quando comparados ao GC. Não houve diferença estatística entre o GC e GPC no número de Linfócitos B (CD19) e de linfócitos T citotóxicos (CD3+/CD8+). Não houve diferença na dosagem das citocinas dos perfis Th1/Th2/Th17 entre os grupos. Conclusão: A PC, sendo uma doença infectoinflamatória local, pode promover alterações no número monócitos e linfócitos T auxiliares circulantes e induzir sua ativação, mas estas alterações parecem não refletir no perfil sistêmico de citocinas.
Abstract: Introduction: Chronic periodontitis is an infectious inflammatory disease from dental protecting and supporting tissues. Its final stages is tooth loss. Studies have shown that the type of host immune response and the kind of immune cells involved, such as, macrophages and T lymphocytes, can influence and change disease progression. Despite its restriction to periodontal tissue and its association to other diseases, the systemic effects of chronic periodontitis on immune cells are still not clear. Objective: The aim of this study is to characterize the phenotypical profile of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from the individuals with chronic periodontitis. Patient and Methods: It is a cross-sectional study with chronic periodontitis patients, treated at the Periodontitis Clinic of UFMA Dentistry Course. The Ethics Committee of UFMA approved the project and all the patients were aware of the research and signed the TCLE. Two groups were established: the control group (GC)(n=22), with healthy individuals and no trace of chronic periodontitis, and the group of chronic periodontitis patients (GPC)(n=26) with no systemic alterations. Blood samples were collected (4 mL) to obtain plasma to perform the IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-, TNF- and IL-17A cytokines dosage, through CBA method. For immunophenotyping, PBMC were obtained through Ficoll-Paque™ PLUS density gradient solution method. For phenotyping of monocytes, B lymphocytes and T lymphocytes, the PBMC were counted, adjusted and abeled with the following monoclonal antibodies conjugated with fluorochromes: anti-CD3 and anti-CD14 conjugate with FITC; anti-CD4, anti-CD25, anti-CD14 and anti-HLA-DR conjugated with PE e anti-CD19, anti-CD86, anti-CD8 and anti-CD4 conjugated with PerCP (BD Biosciences-Pharmingen). Samples were acquired in cytometer (BD FACSCalibur - BD Biosciences) and analyzed in FCAP ARRAY software Version 3.0 and Version 9 FlowJo (TreeStar). Results: There was an increase of total T lymphocytes (CD3+) as well as helper T lymphocytes (CD3+/CD4+) cells and activated helper T lymphocytes (CD3+/CD4+/CD25+) on the GPC, compared to the GC. There was also an increase in the number of monocytes (CD14+), as well as, antigen presenting monocytes (CD14+/HLADR+/CD86+) when compared to the control group. There was no statistical difference between the GC and GPC in the number of B lymphocytes (CD19+) and cytotoxic T lymphocytes (CD3+/CD8+). There was no difference in dosage of cytokines of profiles Th1/Th2/Th17 between groups. Conclusion: Chronic periodontitis, a local infectious inflammatory disease, can cause changes in the number of circulating monocytes and helper T lymphocytes and induce its activation, but these changes do not seem to reflect on the systemic cytokine profile
Palavras-chave: Periodontite Crônica
PBMC
Citocinas
imunofenotipagem
Chronic periodontitis
Cytokines
Immunophenotyping
Área(s) do CNPq: Odontologia
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal do Maranhão
Sigla da instituição: UFMA
Departamento: DEPARTAMENTO DE MEDICINA I/CCBS
Programa: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE/CCBS
Citação: NASCIMENTO, Johnny Ramos do. Caracterização fenotípica de células mononucleares sanguíneas de pacientes com periodontite crônica. 2015. 90 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal do Maranhão, São Luís, 2015.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: https://tedebc.ufma.br/jspui/handle/tede/tede/2253
Data de defesa: 25-Jan-2015
Aparece nas coleções:DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE COLETIVA

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